Originaire de New York, Kristoff St. John débute sa carrière d'acteur à l'âge de dix ans grâce à des apparitions dans des séries telles que Happy Days ou le Cosby Show. Il décroche ensuite en 1985 l'un des rôles principaux de la sitcom de CBS Charlie & Co, mais l'aventure ne dure qu'une seule saison, et c'est vraiment en 1989, lorsqu'il rejoint le soap Générations (premier feuilleton quotidien à inclure dès ses débuts une famille afro-américaine) dans la peau d'Adam Marshall qu'il commence à se faire connaître et à faire parler de lui.

Une fois Générations annulée, il intègre deux ans plus tard, en 1991, le casting des Feux de l'amour dans le rôle de Neil Winters, frère de Malcolm (Shemar Moore) et époux de Drucilla (Victoria Rowell), qui s'impose rapidement comme l'un des héros phares du programme. Un personnage et une série culte dont il fait partie jusqu'à sa mort en 2019 qui lui ont notamment permis de remporter deux Daytime Emmy Awards et plusieurs NAACP Image Awards au cours de sa carrière.