Après des études d'art dramatique au Conservatoire de Marseille, Daniel Mesguich intègre le Conservatoire National supérieur d'Art Dramatique de Paris où il a Antoine Vitez et Pierre Debauche comme professeurs, non sans avoir suivi les cours de philosophie de la Sorbonne.

Il commence sa carrière de comédien en enchaînant les rôles de jeunes premiers dans des classiques, puis fait ses premières apparitions à la télévision et au cinéma à la fin des années 70. Il interprète des personnages secondaires dans des films d'auteur comme Molière d'Ariane Mnouchkine (1978), Le Dossier 51 de Michel Deville (1978), L' Amour en fuite de François Truffaut (1979) et Clair de femme de Costa-Gavras (1979).

Mais très vite son activité de metteur en scène de théâtre, initiée en 1972, prend le pas sur son métier de comédien. Mis à part quelques rôles remarqués dans La Banquiere de Francis Girod (1980), Allons z'enfants d'Yves Boisset (1981) et L' Autrichienne de Pierre Granier-Deferre (1989), Daniel Mesguich se fait de plus en rare sur grand écran jusqu'à la fin des années 90 où il tient le rôle principal du Radeau de la meduse d'Iradj Azimi (1998). En 2003, il est à nouveau en haut de l'affiche avec Le Tango des Rashevski de Sam Garbarski.