Née à Mascate, capitale du Sultanat d'Oman, c’est pourtant en Australie que grandit Isla Fisher, élevée par des parents écossais. Très tôt, elle montre un intérêt pour la comédie et, après des apparitions dans des productions télévisuelles australiennes, tient entre 1994 et 1997 un rôle régulier dans le soap opera Summer Bay, dans lequel Naomi Watts, Heath Ledger, Guy Pearce ou encore Chris Hemsworth ont fait leurs débuts. Ne se contentant pas de faire l'actrice, elle publie à la même époque deux romans (Seduced by Fame et Bewitched) qui deviennent des best-sellers dans son pays.

Après avoir suivi des cours de comédie (notamment ceux de Jacques Lecoq à Paris), elle tente sa chance aux Etats-Unis et décroche en 2002 un rôle dans Scooby-Doo, qui porte sur grand écran les aventures du célèbre chien et de ses amis détectives. Mais c’est en 2005 qu’elle est révélée au grand public grâce à son rôle de nymphomane dans Serial noceurs aux côtés de valeurs sûres de la comédie américaine, Vince Vaughn et Owen Wilson.

Elle poursuit sa carrière en prenant soin de changer de registre à chaque rôle. Ainsi, on la voit tout à tour dans le drame London (2005), la comédie Hot Rod (2006), le polar The Lookout (2007) avec Joseph Gordon-Levitt, ou encore le film d’animation Horton (2008) où elle prête sa voix à l'un des personnages.

2009 lui offre l’opportunité de tenir le rôle principal d’un film : elle est Rebecca Bloomwood, une acheteuse compulsive, dans Confessions d'une accro du shopping, adaptation éponyme d’un best-seller de la chick-lit. En 2011, elle réitère l’expérience du doublage grâce à Rango de Gore Verbinski, où elle donne la réplique à Johnny Depp, et apparaît dans Cadavres à la Pelle, la nouvelle comédie noire de John Landis qui marque le retour sur grand écran du cinéaste, treize ans après Susan a un plan.

En 2012, Isla est choisie pour camper l'un des personnages principaux du lucratif thriller Insaisissables, celui de Henley Reeves, assistante du magicien Jesse Eisenberg. On la voit aussi dans le flamboyant Gatsby le Magnifique, la comédie policière Crimes et petits mensonges, l'horrifique Visions ou encore les comédies d’espionnage Grimsby : Agent trop spécial et Les Espions d'à côté. Décidément à l'aise dans la comédie, elle prend part à Marraine ou presque, L'esprit s'amuse et Bridget Jones : folle de lui.

Isla Fisher reprend aussi son personnage dans Insaisissable 3 (2025), et œuvre beaucoup comme doubleuse (Backstreet Dogs, Retour au bercail et Dog Man). Côté séries, la comédienne joue le personnage féminin principal de la fantastique Wolf Like Me (2022).