Diplômé de l'Académie des Arts Dramatiques de Zagreb, Rade Serbedzija touche à plusieurs arts à travers l'écriture de recueils, la composition musicale, et une grande passion pour le jeu théâtral. Il fait ses premiers pas au cinéma grâce aux grands personnages qu'il a incarnés sur les planches, tels que Don Juan, Œdipe, Hamlet ou Richard III.

Plusieurs réalisateurs le sollicitent pour jouer dans des films sur le grand et le petit écran, comme Bravo maestro ou Bombaski procès en 1978. Parallèlement à une vie associative très active qui lui permet de fonder un théâtre et de lancer plusieurs actions de charité, l'acteur poursuit sa carrière dans le cinéma et gagne la faveur du public en 1994 avec Before the Rain de Milcho Manchevski, dans lequel il porte le rôle principal d'Aleksander. Suite au grand succès du film, salué par des nominations aux Oscars 1995 et à la 51ème Mostra de Venise, Rade Serbedzija s'exporte de plus en plus à l'international en multipliant les rôles dans plusieurs films de réalisateurs différents.

En tournant en 1997 avec Phillip Noyce pour Le Saint, il partage l'écran avec Val Kilmer avant de retrouver John Turturro dans La Trêve (id.) de Francesco Rosi. Parmi les grands réalisateurs avec lesquels il collabore, on trouve notamment Stanley Kubrick, qui le dirige en 1999 dans Eyes Wide Shut où il interprète M. Milich, le propriétaire du magasin de costumes, face à Tom Cruise qu'il retrouve un an plus tard dans Mission: Impossible II, réalisé par John Woo. De Clint Eastwood (Space Cowboys, 2000) à Guy Ritchie (Snatch, id.), en passant par Christopher Nolan (Batman Begins, 2005), l'acteur développe un certain charisme qui lui permet de jouer dans plusieurs films d'aventure et de science-fiction.

On le voit à titre d'exemple dans Shooter tireur d'élite (2007), Harry Potter et les reliques de la mort - partie 1 ou encore dans X-Men: Le Commencement (2011), alors qu'il fait également quelques incursions sur le petit écran en participant à des séries comme 24 heures chrono (2007) et Les Experts : Miami (2008). Serbedzija apparaît en 2012 dans un cadre beaucoup plus calme en tenant le rôle principal de Bepi, poète dans La Petite Venise, le drame franco-italien d'Andrea Segre, sans tarder à regagner l'univers de l'action et des gangsters avec Liam Neeson dans Taken 2 (id.) d'Olivier Megaton.