Actrice "malgré elle", Isabelle Mergault multiplie les petits rôles au cinéma, apparaissant aussi bien dans des oeuvres de qualité (La Dérobade, Diva, Agent trouble) que dans des comédies "franchouillardes" (On n'est pas des anges... elles non plus, Ca va faire mal !). Popularisée par son "cheveu sur la langue", elle se cantonne souvent aux personnages de nunuches écervelées et connaît son heure de gloire en jouant les professeurs lunatiques dans P.R.O.F.S. (1985).

En 1991, elle décide de stopper sa carrière d'actrice de cinéma pour se consacrer à sa véritable passion : l'écriture - on lui doit les dialogues et les scenarii de Voyage à Rome (1992) et Meilleur espoir féminin (2000). Sociétaire de l'émission radiophonique Les Grosses Têtes, elle rejoint dès 1998 la bande à Ruquier, participant au programme On va s'gêner sur Europe 1 avant de devenir chroniqueuse dans On a tout essayé sur France 2. Elle s'illustre également dans les pièces écrites par l'animateur : La Presse est unanime (2003) et Si c'était à refaire (2005-2006).

Malgré son manque de confiance en elle, Isabelle Mergault saute le cap de la réalisation en 2005, dirigeant Michel Blanc dans la comédie "agricole" Je vous trouve très beau, succès surprise du début d'année 2006 récompensé par le César du Meilleur premier film. Encouragée par ce galop d'essai réussi, elle reste fidèle au cinéma populaire et met en scène l'année suivante Enfin veuve, une histoire d'amour contrarié interprétée par Michèle Laroque et Jacques Gamblin. En 2010, elle met en scène un Daniel Auteuil tiraillé entre Medeea Marinescu et Sabine Azéma dans sa comédie, Donnant, Donnant.

Isabelle Mergault se consacre ensuite principalement à sa carrière sur les planches, écrivant et jouant dans des pièces comme L'Amour sur un plateau, Adieu je reste !, Ne me regardez pas comme ça !, La Raison d'Aymé ou encore Adieu je reste !. En 2017, elle tourne sous la houlette de Gérard Jugnot dans C'est beau la vie quand on y pense. Six ans plus tard, elle signe son nouveau long métrage, Des mains en or, une comédie dans laquelle Lambert Wilson, Josiane Balasko et Sylvie Testud ont les rôles principaux.